Prostaglandin E2 induces ovulation in prepubertal mice / Prostaglandina E2 induz ovulação em camundongos pré-púberes

The objective of this study was to determine the ability of prostaglandin E2 (PGE2) to induce ovulation and expression of PGE2 receptor (EP2 and EP4) and COX genes (COX-1 and COX-2) in the ovary and pituitary of prepubertal mice. The positive control consisted of the application of 5 µg of gonadotropin-releasing hormone (GnRH, n = 29); the negative control applied 0.5 mL of phosphate buffered saline (PBS, n=31); the treatment tested the application of 250 µg of PGE2 (n = 29), making a total of 89 prepubertal mice (BALB/c). Mice were euthanized 14 to 15 h after treatments to detect ovulation and tissue collection. A Chi-square test was used to compare the proportion of animals ovulating. Gene expressions and number of ovulation were analyzed by one-way ANOVA and Tukey's test was used to compare means among groups. A greater proportion of mice (P < 0.001) ovulated after receiving GnRH (89.7%, 26/29) compared to PGE2 group (58.6%, 17/29). However, the proportion was higher compared to those treated with PBS (0%, 0/31). Ep2gene expression in the pituitary was > two-fold higher (P < 0.05) in the PGE2 group compared to the PBS and GnRH groups. Further, PGE2 stimulated Cox1 (2.7 fold, P < 0.05) while GnRH stimulated Cox2 expression (6.5 fold, P < 0.05) in the pituitary when compared to the PBS group. In conclusion, our results support the hypothesis that PGE2 can induce ovulation in prepubertal mice with a concomitant increase in Ep2 and Cox1 gene expression in the pituitary gland.(AU)

O objetivo deste estudo foi determinar a capacidade da prostaglandina E2 (PGE2) em induzir a ovulação e expressão do receptor PGE2 (EP2 e EP4) e genes COX (COX-1 e COX-2) no ovário e na hipófise de camundongos pré-púberes. O controle positivo consistiu na aplicação de 5 µg de hormônio liberador de gonadotrofina (GnRH, n = 29); o controle negativo aplicação 0,5 mL de tampão fosfato-salino (PBS, n=31); o tratamento testado aplicação de 250 µg de PGE2 (n = 29), perfazendo um total de 89 camundongos (BALB/c) pré-púberes. Os camundongos foram sacrificados 14 a 15 h após os tratamentos para detectar ovulações e coleta de tecido. O teste do qui-quadrado foi usado para comparar a proporção de animais ovulando. As expressões gênicas e o número de ovulação foram analisados por ANOVA e o teste de tukey foi usado para comparar as médias entre os grupos. Uma maior proporção de camundongos (P <0,001) ovulou após receber GnRH (89,7%, 26/29) em comparação com o grupo PGE2 (58,6%, 17/29). No entanto, a proporção foi maior em comparação com aqueles tratados com PBS (0%, 0/31). A expressão do gene Ep2 na hipófise foi duas vezes maior (P <0,05) no grupo PGE2 em comparação com os grupos PBS e GnRH. Além disso, a PGE2 estimulou a Cox1(2,7 vezes, P <0,05) enquanto o GnRH estimulou a expressão de Cox2 (6,5 vezes, P <0,05) na pituitária em comparação com o grupo PBS. Em conclusão, nossos resultados suportam a hipótese de que PGE2 é capaz de induzir ovulação em camundongos pré-púberes com aumento concomitante na expressão dos genes Ep2 e Cox1 na glândula pituitária.(AU)

Decontamination of genetically modified mice strains by embryo transfer for obtaining SPF colonies in a Brazilian animal facility / Descontaminação de linhagens de camundongos geneticamente modificadas por transferência embrionária para obtenção de colônias SPF em um biotério brasileiro (São Paulo, SP)

The introduction of new strains of mice in specific pathogen-free (SPF) animal facilities should be performed carefully to avoid breaking sanitary barriers. To meet this need, animals should be rederived to reduce infection risk and thus avoid research interference caused by loss of animal health status and welfare. The objective of this study was to implement mice embryo transfer in the laboratory mouse facility of the Department of Immunology at the Institute of Biomedical Sciences/University of São Paulo, Brazil. Embryo transfers were performed to rederive genetically modified mouse strains with undefined sanitary status, received from different research and educational institutions. Fertilized eggs at two-cell stage were obtained by natural means and transferred into the oviducts of SPF pseudo-pregnant female mice. All surgical procedures were performed under aseptic conditions. A total of 625 embryos were transferred into the recipients. 148 pups were born, of which 140 were reared. Viruses, bacteria and intestinal protozoa were eliminated using this technique. The improvement in the microbiological status of mice allowed their expansion in our SPF facility. With these results, we can stimulate the use of embryo transfer technique between rodent facilities in Brazil and thus encourage the distribution of better models to our scientific community.(AU)

A introdução de novas linhagens de camundongos em biotérios livres de patógenos específicos (SPF) deve ser realizada com critérios para evitar a quebra das barreiras sanitárias. Dessa forma, os animais devem ser rederivados para reduzir os riscos de infecção e evitar as interferências provocadas pela perda do status sanitário e do bem-estar dos animais. O objetivo deste estudo foi implementar a transferência de embriões murinos no Biotério do Departamento de Imunologia do Instituto de Ciências Biomédicas da Universidade de São Paulo, Brasil. As transferências embrionárias foram realizadas para rederivar linhagens de camundongos geneticamente modificadas com status sanitário não conhecido, recebidas de diferentes instituições de pesquisa e de ensino. Os embriões em duas células foram obtidos pelos métodos naturais e transferidos para os ovidutos de fêmeas de camundongos SPF pseudoprenhas. Todos os procedimentos cirúrgicos foram realizados sob condições assépticas. Um total de 625 embriões foram transferidos para as receptoras. Foram obtidos 148 filhotes nascidos vivos, destes 140 foram desmamados. Por meio desta técnica, foram eliminados vírus, bactérias e protozoários intestinais. A melhora no status microbiológico dos camundongos permitiu a expansão destes em nossa colônia SPF. Com esses resultados, podemos promover o uso da técnica de transferência de embriões entre os biotérios brasileiros e assim incentivar a distribuição de modelos mais adequados para a nossa comunidade científica.(AU)

Insights from animal models on the immunogenetics of leprosy: a review

A variety of host immunogenetic factors appear to influence both an individual's susceptibility to infection with Mycobacterium leprae and the pathologic course of the disease. Animal models can contribute to a better understanding of the role of immunogenetics in leprosy through comparative studies helping to confirm the significance of various identified traits and in deciphering the underlying mechanisms that may be involved in expression of different disease related phenotypes. Genetically engineered mice, with specific immune or biochemical pathway defects, are particularly useful for investigating granuloma formation and resistance to infection and are shedding new light on borderline areas of the leprosy spectrum which are clinically unstable and have a tendency toward immunological complications. Though armadillos are less developed in this regard, these animals are the only other natural hosts of M. leprae and they present a unique opportunity for comparative study of genetic markers and mechanisms associable with disease susceptibility or resistance, especially the neurological aspects of leprosy. In this paper, we review the recent contributions of genetically engineered mice and armadillos toward our understanding of the immunogenetics of leprosy.

Comparación en la frecuencia espontánea e inducida de aberraciones cromosómicas en médula ósea de ratones OF-1 y C57BL/6/cenp / Comparison between induced and spontaneous chromosomal aberrations in OF-1 and C57BL/6/cenp bone marrow mice

El ensayo citogenético in vivo es un ensayo de mutagenicidad a corto plazo de gran sensibilidad, útil para detectar fundamentalmente aberraciones cromosómicas estructurales in vivo. El objetivo del trabajo consistió en determinar el biomodelo experimental más eficiente en este ensayo mediante la comparación de la frecuencia espontánea e inducida de aberraciones cromosómicas en células de la médula ósea, en uno y otro sexos de 2 líneas de ratones (OF-1 y C-57BL/6/cenp). Se formaron 4 grupos experimentales, uno control negativo, dos tratados durante 14 días con sustancias vehículos por vía oral, NaCl (0,9 por ciento) y tween 65 (2 por ciento), y uno control positivo tratado a las 48 y 24 h antes del sacrificio con ciclofosfamida (50 mg/kg) por vía intraperitoneal. La línea de ratones OF-1 resultó tener una frecuencia espontánea más baja en las variables analizadas que la C-57BL/6/cenp, obteniéndose un menor número espontáneo de células totales con aberraciones y mayor sensibilidad a la ciclofosfamida que la línea C-57BL/6/cenp. Se concluye que los ratones OF-1 y C-57BL/6/cenp, constituyen buenos modelos a emplear en los estudios genotoxicológicos, dada la baja frecuencia espontánea de aberraciones cromosómicas estructurales y numéricas analizadas aunque se recomienda el uso de la línea OF-1

The in vivo cytogenetics array is a very sensible short term mutagenesis method useful to detect mainly the in vivo the structural chromosomal aberrations. The aim of present paper was to determine the more effective experimental bio-model in this type of model to compare the spontaneous and induced frequency of the above mentioned aberrations in bone marrow cells in both sexes of two mice species (OF-1 and C-57BL/6/cenp). Four experimental groups were designed, one of negative control, twotreated during 14 days using oral vehicle substancesm NaCI (0.9 percent) and tween 65 (2 percent) and one of positive control treated at 48 and 24 h before sacrifice using cyclophosphamide (50 mg/kg) by intraperitoneal route. The OF-1 mice species had the lowest spontaneous frequency in variables analyzed that the C-57BL6/cenp species, achieving a lower spontaneous number of total cells with aberrations and a great sensitivity to cyclophosphamide than the C-57BL/6/cenp species. We conclude that the OF-1 and C-57BL/6/cenp mices were good models to be used in genotoxicological studies due to the low spontaneous frequency of the above mentioned aberrations and the numerical ones analyzed, thus it is recommended the use of OF-1 species

Oscillating perceptions: the ups and downs of the CLOCK protein in the mouse circadian system.

A functional mouse CLOCK protein has long been thought to be essential for mammalian circadian clockwork function, based mainly on studies of mice bearing a dominant negative, antimorphic mutation in the Clock gene. However, new discoveries using recently developed Clock-null mutant mice have shaken up this view. In this review, I discuss how this recent work impacts and alters the previous view of the role of CLOCK in the mouse circadian clockwork.

Análise do tecido hepático de camundongos alimentados com dieta enteral contendo prebióticos e contaminadas com Klebsiella sp / Analysis of liver tissue of mice fed an enteral diet containing probiotics and infected with Klebsiella sp / Análisis del tejido del hígado de ratones alimentados con una dieta enteral que contiene probióticos e infectados con Klebsiella sp

Objetivo: Avaliou-se, neste trabalho, o efeito da administração de frutoligossacarídeo (FOS) e insulina, adicionados à dieta enteral, na translocação de Klebsiella sp. para o fígado de camundongos. Métodos: Camundongos albinos suiços, com quatro a seis semanas de vida divididos em três grupos. Os animais do grupo I (controle) receberam apenas dieta AIN93-G. No tratamento II, os animais receberam dieta enteral contendo FOS, insulina, antibiótico e corticóide. No tratamento III, os animais receberam antibiótico e corticóide, dieta enteral sem FOS e insulina. No quinto dia após o início de oferecimento das dietas, os animais dos tratamentos II e III foram alimentados com dieta enteral contaminada com, aproximadamente, 10 UFC/g de Klebisella pneumoniae. Dois animais de cada grupo foram eutanasiados 24h após o fornecimento da dieta contaminada. O fígado desses animais foi coletado assepticamente e mantido em solução fixadora para estudos histológicos. Resultados: Análises histológicas demonstraram características mais intensas de inflamação no fígado dos animais que foram imunodeprimidos com corticóide, alimentados com dieta enteral contaminada com K. pneumoniae e sem prebióticos, em relação aos animais imunodeprimidos que receberam dieta enteral com prebióticos contaminada com com K. pneumoniae. Conclusão: Dietas enterais contendo ingredientes prebióticos diminuíram o grau de lesões degenerativas no tecido hepático.

Objective: We evaluated in this study, the effect of a fructoligosaccharides (FOS) and insulin, added to the enteral diet on translocation of Klebsiella sp. to the liver of mice. Methods: Swiss albino mice, with four to six weeks of life divided into three groups. Animals in group I (control) received only diet AIN 93-G. In treatment II, animals received enteral diet containing FOS, insulin, antibiotics and steroids. In treatment III, animals given antibiotics and corticosteroids, enteral nutrition and FOS without insulin. On the fifth day after start offering the diets, the animals in treatments II and III were fed with enteral feeding contaminated with approximately 10 CFU/g Klebisella pneumoniae. Two animals from each group were euthanized 24 hours after the diet contaminated. The liver of these animals were collected aseptically and kept in fixative solution for histological studies. Results: Histological analysis showed features of more intense inflammation in the liver of animals that were immunosuppressed with corticosteroids, enteral feeding on contaminated with K. pneumoniae and without probiotics, for immunosuppressed animals that received enteral feeding with prebiotics-contaminated with K. pneumoniae. Conclusion: Enteral diets containing prebiotic ingredients decreased the degree of degenerative lesions in liver tissue.

Objetivo: Se evaluó en este estudio, el efecto de una fructoligosaccharides (FOS) y la insulina, sumado a la dieta enteral en la translocación de Klebsiella sp. para el hígado de ratones. Métodos: ratones albino suizo, con cuatro a seis semanas de vida dividido en tres grupos. Animales en el grupo I (control) recibió dieta sólo AIN 93-G. En el tratamiento II, los animales recibieron la dieta enteral que contiene FOS, insulina, antibióticos y esteroides. En el tratamiento III, los animales que recibieron antibióticos y corticosteroides, la nutrición enteral y FOS sin insulina. En el quinto día comenzará después de ofrecer las dietas, los animales en los tratamientos II y III fueron alimentados con la alimentación enteral contaminados con aproximadamente 10 UFC/g Klebisella pneumoniae. Dos animales de cada grupo se sacrificaron 24 horas después de la dieta contaminada. El hígado de estos animales fueron recogidos asépticamente y se mantienen en solución fijadora para estudios histológicos. Resultados: El análisis histológico demostró características de más intensa inflamación en el hígado de animales que fueron inmunodeprimidos con corticosteroides, la nutrición enteral en contaminadas con K. pneumoniae y sin probióticos, por inmunodeprimidos animales que recibieron alimentación enteral con prebióticos contaminados con K. pneumoniae. Conclusión: enteral con dietas que contenían ingredientes prebióticos redujo el grado de lesiones degenerativas en el tejido hepático.

Recent integrations of mammalian Hmg retropseudogenes.

We propose that select retropseudogenes of the high mobility group nonhistone chromosomal protein genes have recently integrated into mammalian genomes on the basis of the high sequence identity of the copies to the cDNA sequences derived from the original genes. These include the Hmg1 gene family in mice and the Hmgn2 family in humans. We investigated orthologous loci of several strains and species of Mus for presence or absence of apparently young Hmg1 retropseudogenes. Three of four analysed elements were specific to Mus musculus, two of which were not fixed, indicative of recent evolutionary origins. Additionally, we datamined a presumptive subfamily (Hmgz) of mouse Hmg1, but only identified one true element in the GenBank database, which is not consistent with a separate subfamily status. Two of four analysed Hmgn2 retropseudogenes were specific for the human genome, whereas a third was identified in human, chimpanzee and gorilla genomes, and a fourth additionally found in orangutan but absent in African green monkey. Flanking target-site duplications were consistent with LINE integration sites supporting LINE machinery for their mechanism of amplification. The human Hmgn2 retropseudogenes were full length, whereas the mouse Hmg1 elements were either full length or 3'-truncated at specific positions, most plausibly the result of use of alternative polyadenylation sites. The nature of their recent amplification success in relation to other retropseudogenes is unclear, although availability of a large number of transcripts during gametogenesis may be a reason. It is apparent that retropseudogenes continue to shape mammalian genomes, and may provide insight into the process of retrotransposition, as well as offer potential use as phylogenetic markers.

Expression of mdr isoforms in mice during estrous cycle and under hormone stimulation

The multidrug resistance (MDR) phenotype is associated with the expression of P-glycoprotein (Pgp), coded by the multigenic mdr family. Mice present the isoforms mdr1 and mdr3, which are responsible for multidrug resistance, and mdr2, that is involved in the transport of phospholipids. mdr1 expression has more recently been associated also with the secretion of steroid hormones. This work presents an RT-PCR analysis of the expression of mdr isoforms, in several organs of mice during different phases of the estrous cycle. Additionally, females were ovariectomized, submitted to different hormone treatments, and their uterus was analyzed for the expression of mdr isoforms. The results show that in the adrenal gland and ovaries mdr1 is the main isoform during proestrus, and that progesterone or a combination of progesterone and estrogen induce the expression of all mdr isoforms in the uterus of ovariectomized females. We suggest that the functions of mdr1 and mdr3 are overlapping, that mdr3 may be the more efficient isoform in the detoxification function, and that mdr1 may be more closely related to the secretion of steroid hormones.

Avaliação morfológica e molecular de lesões colônicas em modelo de colite experimental induzida por dextran sulfato de sódio / Morphological and molecular evaluation of colonic lesions in a mouse model of experimental colitis induced by Dextran Sulfate Sodium (DSS)

A retocolite ulcerativa (RU) é uma doença inflamatória crônica que caracteristicamente afeta o reto e o intestino grosso e cuja etiologia ainda é desconhecida. Os pacientes portadores de RU apresentam um alto risco para o desenvolvimento de câncer colorretal (CCR). O desenvolvimento e a progressão do câncer associado à RU envolvem vários eventos genéticos que parecem ser diferentes dos observados nos cânceres esporádicos... O modelo animal de colite através do uso de DSS desenvolve displasia e câncer muito similares aos observados em humanos. O estudo da carcinogênese do cólon nestes animais pode ser de grande valia para o melhor entendimento das alterações que ocorrem em humanos e pode proporcionar o descobrimento de novos marcadores ou mesmo regimes quimiopreventivos para o câncer relacionado à RU. O objetivo deste estudo é elucidar os eventos moleculares das neoplasias relacionadas à RU no modelo experimental animal de colite induzida por DSS, traçando um paralelo com os estudos moleculares realizados em humanos. Para isto, foram utilizadas duas abordagens. A primeira, relacionada com a pesquisa de alterações moleculares nas neoplasias originadas no modelo de colite pelo uso de DSS e Azoxymethane (AOM) em animais sadios, onde foram avaliados os genes Trp53, k-ras, Apc e ß-catenina. A segunda, relacionada com o uso de DSS em animais alterados geneticamente para o gene Trp53, considerado o evento inicial nos tumores associados à RU... Nos animais geneticamente alterados para o gene Trp53 a pesquisa de mutação no gene k-ras foi negativa. Estes animais demonstraram a presença de displasia e câncer, também muito similares aos humanos, sendo que os animais homozigotos (p53-/-) apresentaram uma maior incidência de lesões quando comparados aos animais heterozigotos (p53+/-) e controles p53 (+/+)...

Ulcerative Colitis (UC) is a diffuse inflammatory disease of the colorectum, which etiology is unknown. UC patients are at increased risk of developing colorectal cancer (CRC). Development and progression of UC-associated to CRC involves multiple genetic alterations that appear to be different from those of sporadic cancer. Alterations of APC gene and k-ras gene are less frequent than in sporadic colorectal neoplasia. Although, alterations of TP53 gene is a frequently observed in both UC associated tumors and sporadic tumors, this alteration is an early event in UC related tumors but it is occurs late in sporadic tumors. Dextran Sulfate Sodium (DSS) mouse colitis model develop dysplasia and cancer similar to UC in human. Studies of colon carcinogenesis in this model can be very useful to elucidate mechanisms and provide development of markers or hemoprevention approaches in the human situation. The aim of this study is to establish the molecular events in a DSS mouse colitis model associated neoplasia in parallel with the molecular alterations seen in humans. Two different approaches had been used to achieve this goal. First, investigate molecular events in neoplastic lesions developed in a mouse model of colitis using DSS in combination with Azoxymethane (AOM) in healthy animals. In this approach, it was investigate genes, such as Trp53, k-ras, ß-catenin and Apc. Second, evaluate genetic events in mice deficient in the Trp53 gene, considered an early event in RUassociated tumors. Besides k-ras evaluation, it was also evaluated the histological aspects of the colonic lesions in this model. ß-catenin mutation (codons 32 and 34) and translocation ß-catenin were observed in healthy animals using DSS/AOM. No mutation of k-ras and Apc were observed and Apc LOH was not informative. DSS induced colitis in p53 deficient mice developed dysplasia and cancer. p53-/- (homozygous) showed a higher incidence of tumors when compared with p53+/- (heterozygous) and p53+/+ (wild-type) animals. No mutation of k-ras gene was observed. Besides dysplasia and cancer, p53-/- and p53+/- animals developed colite cystica profunda and hyperplastic lesions, both observed in patients with UC. The further accumulation of data originated in studies with mouse models of colitis related-neoplasia chemically-induced should provide information for better understand UC- related colorectal neoplasia in humans (AU)

Reduced meiotic fitness in hybrids with heterozygosity for heterochromatin in the speciating Mus terricolor complex.

Mus terricolor I, II and III are the three chromosomal species which differ in stable autosomal short-arm heterochromatin variations established in homozygous condition. Analysis of meiosis in the laboratory-generated F1 male hybrids from crosses (both ways) between M. terricolor I and II and between M. terricolor I and III shows high frequencies of pairing abnormalities at pachytene. The backcross (N3 generation) male hybrids between M. terricolor I and II have meiotic abnormalities as in the F1 male hybrids, though to a lesser extent. They show difference in pairing abnormalities in the different karyotypic forms; the backcross hybrids heterozygous for the heterochromatic short arms have more anomalies compared to the homokaryotypic hybrids. This suggests a negative influence of the heterochromatin heterozygosity in meiotic pairing. The results indicate a role for heterochromatin variations in the development of a reproductive barrier in the speciating M. terricolor complex.

Differential organization of a LINE-1 family in Indian pygmy field mice.

Southern blot hybridization analysis of genomic DNAs digested with restriction endonuclease EcoR I and Ava II from Mus musculus domesticus, Mus booduga and Mus terricolor with a cloned repetitive DNA fragment of Mus booduga as a probe showed difference in restriction pattern of this DNA in these three species. Further Southern analysis of the BamH I digested genomic DNAs from these species hybridized with cloned DNA fragment as a probe and sequencing of the cloned DNA revealed that this 252 bp cloned DNA fragment is a part of BamHI repeat element of genus Mus and is 87% homologous to the contiguous portion of the Mus musculus domesticus LINE-1 element. The species specific fragment pattern generated by different restriction endonucleases using this DNA as a probe revealed difference in the organization of LINE-1 repetitive element in the three species of genus Mus.

Transferencia embrionaria en modelo ratón / Embryo transfer in mice, experimental model

La transferencia embrionaria (TE) se utiliza para optimizar la fertilización in vitro (FIV). Se trata de establecer un modelo experimental de TE que permitía la implantación y desarrollo de embriones. Se emplearon 53 ratones hembras adultas, 23 donadoras y 22 receptoras. Diez donadoras recibieron estimulación ovárica con gonadotrofina coriónica intraperitoneal (i.p., 1UI/ratón). Catorce receptoras recibieron estimulación endometrial con gonadotrofina menopáusica humana (i.p, 2 UI/ratón). Se comprobó la gestación con Papanicolaou en el frotis vaginal. La obtención de embriones fue mayor (p<0.05) en animales con estimulación ovárica comparados con los que no recibieron este tratamiento, tanto en obtención de embriones de 48 h (8.8 ñ 1.6 y 6.4 ñ 0.6, respectivamente) como en embriones de 72 h (6.1 ñ 0.8 y 4.0 ñ 0.7, respectivamente). El porcentaje de éxito de fertilización fue semejante en animales receptores con o sin estimulación endometrial independiente de la edad del embrión (50 por ciento con y 37 por ciento sin estimulación). La duración de la gestación fue mayor (p<0.05) en animales con estimulación endometrial (9.4 ñ 0.7 días) comparada con los que no recibieron tratamiento (6.3 ñ 0.3 días). Aun cuando el porcentaje de éxito de la FIV fue bajo, se logró establecer un modelo experimental. Se concluye que el número de embriones recuperados fue mayor con estimulación ovárica, siendo su sobrevida intrauterina algo más prolongada en animales receptores con estimulación endometrial

Importancia de la microscopía electrónica de transmisión en el diagnóstico de la epidemia de encefalitis equina venezolana de 1995 en la Guajira Venezolana / The importance of transmission electron microscopy in the diagnosis of venezuelan equine encephalitis during the epidemic of 1995 in the venezuelan Guajira

Se estudió con el microscopio electrónico de transmisión el cerebro de 25 ratones lactantes, inoculados intercerebralmente con el sobrenadante de células VERO cultivadas e infectadas con el virus de la EEV, como control positivo, con muestras de suero o líquido cefalorraquídeo de pacientes con síntomas y signos de encefalitis, con sueros de pacientes sanos, con sueros de equinos enfermos y con solución borato-salina de albúmina bovina, como control negativo. Las muestras se tomaron del brote epizoótico y epidémico en Octubre del año 1995 en la región de la Guajira Venezolana al norte del Estado Zulia. El estudio ultraestructural se hizo a ciegas, pero, confirmo la presencia de pacientes de Togavirus en el 100 por ciento de los casos examinados cuando correspondían a muestras virológicamente positivas. Se destaca la utilidad, precisión y la rapidez del método empleado

Ausencia de genotoxicidad en extractos fluidos de Ortosiphon aristatus Blume (Te de rinon) y Lepidium virginicum L. (Mastuerzo) / Lack of genotoxity in fluid extracts from Ortosiphon aristatus Blume (te de rinon) and Lepidium virginicum L. (mastuerzo)

Se procede a evaluar la posible actividad genotoxica de extractos fluidos de Ortosiphon aristatus Blume (te de rinon) y Lepidium virginicum L. (mastuerzo). Se realizan las pruebas de segregacion somatica en Aspergillua nidulans y la induccion de micronucleos en medula osea de raton. En el ensayo de sdegregacion mitotico ,las colonias de Aspergillus crecieron durante 6 y 10 dias en medio de cultivo agarizado con extracto fluido. Se evaluaron cinco concentraciones ded los extractos, en un rango de 0,08 a 1,6 mg de solidos totales/mL. Para ninguna de las concentraciones ensayadas en ambos extractos se encontraron incrementos significativos en la frecuencia desectores segregantes por colonia, indicador e genotoxicidad para esta prueba. El test de micronucleos se realizo en ratones albinos de la linea no isogenica suizo, a los que se hicieron dos administraciones orales de los extractos, separadas 24 h entre si, con sacrificio 24 h despues de la ultima aplicacion. Para el extracto de mastuerzo las dosis aplicadas fueron de 0,6 1,2 y 2,4 g/kg de pc (peso corporal) y del extracto de te de rinon 1,75 2,21 y 2,84 g/kg de pc. En ninguno de los extractos estudiados se detectaron efecto citotoxico sobre la rpoliferacion celular en la medula osea, ni aumentos significativos en la frecuencia de eritrocitos policromaticos micronucleados (mPCE), indicador de mutagenicidad para este ensayo, vinculados a los tratamientos con los extractos fluidos de mastuerzo y te de rinon

Papel del rhodnius prolixus en la transmisión del virus de la encefalitis equina venezolana / The role of rhodnius prolixus in the transmission of venezuelan equine encephalomyelitis virus

Se investigó el papel del Rhodnius prolixus (chipos) como agente transmisor del virus de la Encefalitis Equina Venezolana (EEV), mediante ensayos con alimentación en pollos en fase virémica y con mezcla sangre-virus, y posterior realimentación sobre ratones recién nacidos. Igualmente se averiguó aspectos relacionados con la persistencia del virus en la especie citada de triatoma, así como la infecciosidad del agente para pollos de corta edad. Los resultados mostraron que no hubo transmisión directa del virus desde los chipos a los ratones en prueba, indicando un nulo papel del Rhodnius prolixus en el ciclo epidemiológico de la EEV. Se comprobó la persistencia del virus en los chipos hasta diez días después de la comida infectada y una viremia de breve duración y bajo título en los pollos

Encefalitis equina experimental: estudio histológico, histoquímico y ultraestructura / Experimental venezuelan equine encephalitis: histologic, histochemical and ultrastructural study

Se presentan observaciones ultraestructurales sobre el desarrollo del virus de la encefalitis equina venezolana (EEV) en el cerebro de ratones lactantes que describen la manera como se forman los nucleocápsidos, su transformación en partículas virales por gemación en las membranas y la organización de la envoltura. Se discuten estos hallazgos y se comparan con los resultados del estudio del virus purificado, aislado, separando sus componentes estructurales con DOC y examinando las particulas en presencia de suero con anticuerpos, utilizando el método de tinción negativa. Se discute la morfogénesis del virus de la EEV en el corazón, sistema nervioso, sistema reticuloendotelial, pulmón y el papel del endotelio como transportador de las partículas virales. Se estudia la actividad de la fosfatas ácida en el tejido nervioso y se hacen algunas consideraciones sobre los lisosomas y la respuesta tisular ante la agresión viral. Se comentan algunos hallazgos histoquímicos sobre la actividad de la ATPasa. Se estudia con el microscopio de la luz el bazo y el cerebro de ratas inoculadas por la vía ip con el virus de la EEV y se discuten alteraciones observadas relacionadas con la respuesta celular de las ratas ante la infección viral. Se estudia con el microscopio de luz y electrónico el sistema nervioso de ratas sobrevivientes a la infección con el virus de la EEV y se demuestran alteraciones que se consideran secuelas neuropatólogicas de la infección. Se discuten estos hallazgos en base a los conocimientos actuales sobre secuelas neurológicas en humanos, después de la infección con el virus de la encefalitis equina venezolana. Se examina histológicamente el sistema nervioso central de ratas inoculadas ip con el virus de la EEV y otras utilizadas como control, en las cuales se observaron evidencias histológicas de toxoplasmosis cerebral. Se señala el efecto del virus y de los mecanismos inmunológicos en la reactivación experimental de esta enfermedad en la rata. Se examina histológicamente y por titulación de virus, placenta, embriones y fetos de ratas inoculadas ip con el virus de la EEV, durante la primera, segunda y tercera semana de gestación. Se demuestra multiplicación del virus en la placenta. Durante las dos primeras semanas se produce muerte y reabsorción de los embriones. Las alteraciones durante la tercera semana examinadas entre el 2do y 4to día post inoculación se localizan inicialmente en los vasos miometriales

H-2 and complexes in wild mice

Quatro haplotipos-t (tMO, tRA, tLA e tQU) foram isolados independentemente de populaçöes separadas de camundongos selvagens do chile. Estes haplotipos-t estäo sendo mantidos no laboratório dos autores como diferentes linhagens sem rabo em combinaçäo com o cromossomo "brachyury" (T). Todos os haplotipos estäo associados a uma forte supressäo de recombinaçäo genética, entretanto eles mostram diferentes graus de distorçäo na razäo de transmissäo. Quando testados sorologicamente para presença de determinantes antigênicos de H-2 encontrados em linhagens endocruzadas, os camundongos com t näo reagiram com a maioria dos antisoros H-2, entretanto a combinaçäo de antígenos H-2 encontrada foi suficiente para diferenciar cada haplotipo. Ohaplotipo letal tRA foi caracterizado antigenicamente através da presença do determinante particular H-2D.2 e o haplotipo viável tMO foi caracterizado pela presença dos determinantes particulares H-2D.2 e H-2K.19. Estes resultados de caracterizaçäo do tipo H-2 estäo de acordo com resultados previamente encontrdos de parentesco forte entre MHC dos haplotipos-t e pelo menos alguns dos genes clássicos MHC encontrados em linhagens endocruzadas